Essee ABTS
See on analüüsimeetod, mis kasutab proovi antioksüdantide võimsuse määramiseks spektrofotomeetrilist mõõtmist. UV-Vis spektrofotomeetri abil mõõdetakse ABTS-+ radikaali lahuse neelduvus, mis saadakse ABST (2, 2'-asinobis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfonaat), värvitu aine oksüdeerimise teel. radikaalid on värvitud, neeldudes lainepikkustel nähtavas vahemikus Antioksüdantmolekulide ABTS + + lahusele lisamine, mis võib toimida nii vesiniku kui elektroni ülekandmisel, määrab radikaali redutseerimise värvitu vormiks, sellest tulenevalt reaktsioonisegu värvimuutus. Seda pleegitamist, mis on proportsionaalne olemasoleva antioksüdandi kogusega, saab mõõta neeldumise vähenemisena teatud aja jooksul teatud lainepikkusel (734 nm). võrdlusstandardiks valitud antioksüdantmolekuli teadaolevate koguste puhul mõõdetud neelduvusväärtused, mis on tavaliselt askorbiinhape või Trolox (antud juhul räägime TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity antioksüdandi aktiivsusest.
ABTSi kasutamisel põhineva antioksüdandi võimsuse mõõtmise eeliseks on lihtne ja kiire. Lisaks võimaldab see mõõta nii hüdrofiilset kui ka lipofiilset antioksüdantide ainet laias pH vahemikus. Siiski tuleb meeles pidada, et kasutatav radikaal (ABTS + +) ei ole füsioloogiline ega ole bioloogilistes süsteemides ning et erinevate antioksüdantide reaktsioonikineetikast tingitud mõõtmete korratavuse probleemid on sageli esile tõstetud.
FRAP (ferriline redutseeriv antioksüdantne võimsus)
FRAP-test mõõdab antioksüdantide vähendavat võimet rauaioonide vastu. See on meetod, mis põhineb elektronide ülekandmisel, milles raudioonid liiguvad Fe3 + -st Fe2 + -ni. Teatud pH (3, 6) tingimustes ja TPTZ (2, 4, 6-tris (2-püridüül) -s-triasiin) juuresolekul moodustavad need ioonid erinevate omadustega komplekse, eriti vähendatud derivaati (Fe2 +). -TPTZ) eeldab sinist värvi, mille maksimaalne absorptsioon on 593 nm ja mida saab mõõta spektrofotomeetriliselt. Antioksüdantide redutseerimissuutlikkust võib seega mõõta oksüdanti sisaldava lahuse neeldumise muutusena lainepikkusel, mis on määratud võrreldes standardiga (nt askorbiinhappega) seotud variatsiooniga.
FRAP test oli kavandatud plasmi redutseeriva võimsuse mõõtmiseks, kuid seejärel kohandati puhta ühendi ja komplekssete maatriksite antioksüdantvõime testimiseks. Tegelikult, kuna see meetod võimaldab hinnata ainult redutseerivat võimsust elektronülekandega, ignoreerides täielikult antioksüdantide toimet, mis toimivad vesinikuülekande kaudu, ei võimalda see mõõta selliste molekulide nagu tioolide ja valkude osakaalu, mis mängivad antioksüdantset rolli. bioloogilistes vedelikes (nt veres). Selle meetodi kasutamise eeliseks on see, et see on üks lihtsamaid, kiiremaid ja odavamaid meetodeid antioksüdantide võime määramiseks in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenüül-1-picrilhüdrasüül (DPPH •) on väga stabiilne ja kaubanduslikult saadav lämmastiku radikaal, mida iseloomustab intensiivne lilla-punane värvus, mis tuhmub, kui seda redutseeritakse antioksüdantvõimega molekuli juuresolekul. DPPH lahuse neeldumise muutuse spektrofotomeetrilise mõõtmisega 517 nm juures pärast reaktsiooni antioksüdantühendiga on võimalik uuritava aine redutseerimisvõimet kvantifitseerida olenemata sellest, kas see toimib vesinikuülekande või elektroni ülekandega. Tulemust väljendatakse üldiselt IC50-na, st antioksüdandi kogust, mis on võimeline vähendama esialgset DPPH kontsentratsiooni 50%.
See on kiire, lihtne ja odav meetod. Selle analüütilise meetodi piirid on antud võimalusega, et analüüsi tulemused on moonutatud juhul, kui uuritavad molekulid absorbeeruvad DPPH radikaali samas lainepikkuse vahemikus või steeriliselt segatud suurte molekulide juures, mis ei ole nad reageerivad radikaali reaktiivse osaga. Selle tulemusena reageerib DPPH antioksüdantidega kuni 1000 korda aeglasemalt kui peroksüülradikaalid.
PCL-test (fotokeemiluminestsents)
PCL-test põhineb konkreetse radikaalliigi, superoksiidi aniooni (O2 • -), mis on UV-kiirgusega fotokeemiliselt tekitatud, reaktsioonil kemoluminestsentsi kiirgava ühendiga. Kasutatud marker on luminool, molekul, mis vabade radikaalide oksüdeerimisel eraldab valgust, mida saab mõõta spetsiaalse instrumendi abil (Photochem®). Antioksüdantide sisaldus söödasegus deaktiveerib radikaalliigid, mis pärsivad kemoluminestsentsi emissiooni. PCL-analüüs on väga kiire ja tundlik. Peale selle võib kahe erineva analüütilise protokolli, nimega ACW (antioksüdantvõimsus vees lahustuv) ja ACL (antioksüdantide võime lipiidlahustuv) rakendamisega mõõta sama ühendi puhul vees lahustuva komponendi (flavonoidide, E-vitamiini) kogu antioksüdantvõimsust. C, aminohapped jne) kui rasvlahustuv (tokoferoolid, tokotrienoolid, karotenoidid jne). Uuritava toote antioksüdantvõimsus saadakse standardse võrdlusmolekulide, ACL-protokolli askorbiinhappe ja ACW-protokolli Troloxi mõõtmistega registreeritud väärtuste võrdlemisel.
